Anthropologiai Közlemények 54. (2013)
Eredeti közlemények - Spekker, O. - Pósa, A. - Pálfi, Gy. - Zink, A. - Maixner, F. - Bereczki, Zs. - Molnár, E.: Specifikus fertőző megbetegedés diagnózisa Vésztő Mágori-halom újkőkori leletein
paleopatológiai analízist megelőzően a teljes szériát megvizsgáltuk az elhalálozási életkor becslése, valamint a sexus megállapítása céljából. Ezek meghatározása során standard makromorfológiai módszereket alkalmaztunk (Schour és Massier 1941, Ery és mtsai 1963, Acsádi és Nemeskéri 1970, Vicék 1974, Stloukal és Hanakova 1978, Brothwell 1981, Ubelaker 1989, Loth és Isman 1989). A paleopatológiai analízis előtt a vizsgálható csontmaradványok megtartási állapotát is rögzítettük egy háromfokozatú skála segítségével. „Jó” megtartási állapotúnak tekintettük a maradványokat, ha a koponya és a vázcsontok (beleértve a kéz- és lábcsontokat, csigolyákat, valamint a bordákat is) 80-100%-a rendelkezésre állt a vizsgálathoz. „Közepes” megtartás esetén csak a maradványok 50-79%-a volt vizsgálható, míg „töredékes” megtartásúnak tekintettük a leleteket, ha a csontok kevesebb, mint 50%-a volt alkalmas a tanulmányozásra. A széria paleopatológiai vizsgálata során a tbc-re jellemző klasszikus csontelváltozások (Pott-féle megbetegedés/spondylitis tuberculosa, a nagy ízületek tbc-s arthritis, pl. Steinbock 1976, Páli és mtsai 1999, Ortner 2003) mellett a tuberkulózissal összefüggésbe hozható, azonban arra nem specifikus léziókat (endocranialis elváltozások, bordaléziók, superficialis csigolyaelváltozások/hypervascularisatio, diffúz bilaterális periostitis; Kelley és Micozzi 1984, Schultz 1993, 1999, 2001, Roberts és mtsai 1994, Baker 1999, Santos és Roberts 2001, 2006, Hershkovitz és mtsai 2002, Pálfi 2002, Maczel 2003, Matos és Santos 2006, Dutour 2008) is figyelembe vettük. Bizonyos, fertőzésekhez gyakran kapcsolódó, korábban „stressz indikátor” vagy „nem specifikus stessz marker” kategóriába sorolt tüneteket (pl. eribra orbitalia, eribra cranii, hosszúcsont periostitis) szintén feljegyeztünk. Molekuláris biológiai módszerek A makromorfológiai alapon felállított diagnózisokra épülő molekuláris biológiai vizsgálatok Bolzanoban (Olaszország, Ancient DNA Laboratory of the Institute for Mummies and the Iceman, EURAC Research) zajlottak. A paleomikrobiológiai vizsgálatok tárgyát 5 minta képezte. Négy egyén (5., 6. és 13. sír — feltételezett tbc; 39. sír — tbc szempontjából makromorfológiailag negatív) esetében egyénenként egy-egy fogból, míg a 33. sírszámú juvenis férfinél (feltételezett tbc) - a fogak hiánya miatt - a jobb humerus corticalis állományából történt a DNS extrakció (Pósa és mtsai 2012). A minták előkészítése során a felszín tisztítása 30%-os NaOCl-oldattal történt, majd kétszeres öblítésre került sor DNS- és RNS-mentes steril víz felhasználásával. A csontminták külső felszínének eltávolítása - Dremel nagysebességű fúró segítségével - egy erre a célra kijelölt mintaelőkészítő helyiségben zajlott. Az ily módon megtisztított minták porítása Retsch őrlőmalommal történt. A DNS extrakcióra 250 mg csontporból került sor, melynek során első lépésben a csontőrleményhez 5 ml EDTA-t és 20 pl (20 mg/ml) proteináz K-t adtunk, majd a keverést követően 40°C-on, overnight (egy éjszakán át) inkubáltuk. Második lépésben a minták felülúszójának — 2,5 ml puffer (binding buffer), valamint 100 pl szilika szuszpenzió hozzáadása után 3 órás inkubációja következett. A későbbiekben a Rohland és mtsai által leírt szilika alapú DNS extrakciós protokollt (Rohland és mtsai 2009) követtük, kisebb módosításokkal. Az extrakció után a DNS amplifikálására egy, a polimeráz láncreakción (PCR) alapuló technikát (hot-start PCR) alkalmaztunk. A MTBC tagjainak genomjában egy rendkívül konzervált, IS6110 nevű repetitív inszerciós elem található, amely sejtenként akár 24 kópiában is jelen lehet (Salo és mtsai 1994, Baron és mtsai 1996). A PCR reakció során az IS6110 egy speciális, 123 bp hosszúságú locusát amplifikálták IS6110F - IS6110R primerpár segítségével. A hot-start PCR-t (ciklusszám: 45) kereskedelmi forgalomban kapható kittel (Ampli tag