Orvosi Hetilap, 1969. augusztus (110. évfolyam, 31-35. szám)

1969-08-31 / 35. szám - ÖSSZEFOGLALÓ REFERÁTUM - Az L-asparaginase klinikai jelentőségéről

ÖsszefoglalóEFERATVM Szegedi Orvostudományi Egyetem, II. Belgyógyászati Klinika (igazgató: Földi Mihály dr.) Az L-asparaginase klinikai jelentőségéről Berikó Sándor dr. 1. Bevezetés Az utób­bi években tett megfigyelések szerint az L-asparaginase, amit tengerimalac szérumából és Escherichia coliból állítottak elő, gyógyító hatá­súnak bizonyult egerek lymphomájában és emberek akut leukaemiájában. Ez az első adat, amely sze­rint egy enzim szelektív biokémiai hatás útján gá­tolni képes bizonyos daganatfajták növekedését, összefoglaló referátumomban az L-asparaginase ha­tásmechanizmusáról és klinikai jelentőségéről kí­vánok beszámolni. 2. Experimentális előzmények Clementi (16) 1922-ben írta le, hogy a tengeri­malac széruma az L-asparagint bontja. Később a sa­vó tumorgátló hatását annak L-asparaginase tartal­mával hozták összefüggésbe. Kidd (25) figyelte meg, hogy a tengerimalac savója különböző egér-lympho­­mákat és patkány Murphy-féle lymphosarcomáját regressióra bírja. A C 3H egértörzs mammasarcomá­­ja és a 180 jelzésű fibrosarcoma a tengerimalac savó kezelésre nem reagált. Más állati savó és az emberi savó hatástalannak bizonyult. Broome (9, 10) tisz­tázta, hogy tengerimalac szérumban az L-aspara­ginase a tumorellenes faktor. Az enzimet újszülött állat savója nem tartalmazza, ő figyelte meg azt is, hogy az L-asparaginase érzékeny daganatsejtek szö­vetkultúrában asparaginsavat és asparagint igényel­nek. Az L-asparaginaseval szemben rezisztens sej­tek asparagin hozzáadása nélkül is képesek szapo­rodni (11). 3. Az L-asparaginase előfordulása és biológiája Az L-asparaginase enzimhatástani beosztás szerint L-asparagin­ amino-hydrolase, amely az asparagint as­­paraginsavra és ammóniákra bontja. Az L-asparagin minden állati sejtben megtalálható, a magasabbrendűek szintetizálni tudják és a táplálékkal bevitt asparagint a vizelettel kiürítik. Az asparagin növényi sejtek növe­kedési faktora. L­asparaginase kimutatható többféle baktériumban, így az Escherichia coli-ban, a Brucellában, a Mycobak­­térium tuberculosis-ban, továbbá gombákban, valamint magasabbrendű növényekben. Asparaginaset kicsiny aktivitásban találtak az álla­tok belső szerveiben is (16), nagyobb mennyiségben van a növényevők (tengerimalac, ló) májában és a patkány, egér májában (20). Az asparaginase I. vízben oldható, sav- és hőérzékeny, az asparaginase II. is vízben old­ható, de relatíve sav- és hőstabilis, és pyruvattal ak­tiválható (pH 8,0). Orv. Hetilap, 1969. 110. évf. 35. sz. L-asparaginaset egészséges C3H egerek májában mutatták ki (30), és feltűnően sok enzimet tartalmaz a tengerimalac savója és a préri nyúlé, az agouti-é (36). Ugyanezen állatok szérumában igen alacsony az L-as­paragin szint. Egyéb állatok, tyúk, macska, kutya, ser­tés, juh, marha, ló, majom és nyúl széruma vagy sem­mi, vagy pedig rendkívül alacsony L-asparaginase ak­tivitással tűnik ki (44). Emberi szérumnak igen enyhe tumorgátló hatása van (21). A szérumban levő L-as­paraginase képződési helye ismeretlen; a máj jöhet el­sősorban szóba mint termelőhely. Lymphoma-ellenes hatással a tengerimalac-szérumból előállított L-aspara­ginase II. (36) és az Escherichia coliból előállított L-as­paraginase rendelkezik (32). 4. L-asparaginase előállítása és főbb sajátságai Az L-asparaginase előállítása és tisztítása tengeri­­malac savóból komplex művelet (17, 10, 44). Az enzim igen specifikus és hőérzékeny; 40° C-on­ fokozatosan, 60° C-on pedig gyorsan elveszti aktivitását; pH-opti­­mum 7,0. Az aktiválódási energia 4125 cal/mol. A fer­ment hatékonysága a substratumtól függő. Michaelis —Menten konstansa 2,2X10­ 3M (44). A tengerimalac savó L-asparaginase koncentrációja nem függ a törzs­től, nemtől és a táplálék L-asparagintartalmától, de az állat korától igen, amennyiben az életkor előrehalad­tával növekszik (44). Broome (10) elektroforesissel a tengerimalac szérumban kétféle L-asparaginaset kü­lönített el, az 1-L-asparaginaset, amelynek pH-opti­­muma 7,5—8,6; és antilymphoma hatással rendelkezik és a 2-L-asparaginaset, amelynek pH-optimuma 8,5. Ez utóbbinak tumorgátló hatása nincs és egérsavóval inaktiválható (41). A tengerimalacsavó L­asparaginase akkor fejti ki lymphoma-ellenes hatását, ha a tumor inokulációjával egyidejűleg alkalmazzák (8). A bevitt enzimet a máj RES-sejtjei tárolják és le is bontják; a szérumból 8 óra alatt praktikusan eltűnik (12). Lymphomás egerek­ben a lebontás üteme sokkal lassúbb, 20—30 óra (12). Az enzim a vizelettel nem választódik ki és a vér-li­­quor-barrier­t nem lépi át. Az Escherichia coli-ból állítható elő a leghatéko­­nyabb tumorellenes L­asparaginase. A kivonási eljá­rás módszerét többen leírták (15, 41). 800 liter Coli­kultúrából circa 0,3 g enzim nyerhető. Különösen ne­héz feladat a coli-ból történő előállításnál az enzim endotoxin mentesítése. Az Escherichia coli-ból is két­féle L-asparaginase vonható ki: az E. C. 1-jelzésű, pH optimum 8,4, ennek antilymphoma hatása nincs; az E. C. 2-L-asparaginase, pH optimuma 6—8,4 és igen in­tensiv tumorellenes hatású. Ez utóbbi már tartósan fennálló leukaemiákban is kifejti gyógyító hatását, szemben a tengerimalac-savó L-asparaginasejával. Ste­ril fiz. sóoldatban oldva —16° C-on hónapokig tárol­ható, de még +5° C-on tartva is néhány hétig megtartja aktivitását (35). Az E. C. 2-L-asparaginase aktivitásá­nak felezési ideje 24 óra. Az enzim aktivitásának mérése az L-asparagin hid­rolíziséből felszabadult ammónia mennyiségének meg­határozásán alapul. Az egység az az enzimmennyiség, amely 1 óra alatt 1­umol NH3-at tesz szabaddá. Egy nemzetközi egység (IU) egy perc alatt 1 jumol NH3-at felszabadító enzim­mennyiség (35). A specifikus enzim­aktivitás (nemzetközi egység pro mg protein) kifejezője a preparátum tisztasági fokának (31). 1*

Next